国语对白老太做爰xxoo,庥痘产精国品2023,久久中文字幕无码不卡毛片,孩子每次弄我只能装睡着

什么是熒光定量PCR、數(shù)字PCR�

2022-11-23 金夢(mèng)
一、技�(shù)�


在全球醫(yī)療器械行�(yè)中,體外診斷是占比最高的�(xì)分領(lǐng)域之一,根�(jù)診斷原理的不同,體外診斷�(chǎn)品分為分子診�、免疫診�、生化診斷等多種類型。其中,分子診斷的靈敏度、特異�、準(zhǔn)確性等均較為突出,尤其是在新冠肺炎疫情全球蔓延的大背景�,以PCR為代表的分子診斷技�(shù)得到了加速發(fā)��

PCR,即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的英文縮寫,是一種以DNA雙鏈�(fù)制原理為基礎(chǔ),對(duì)特定核酸樣本�(jìn)行體外擴(kuò)增的生物技�(shù),能�?qū)⑽⒘康暮怂針颖狙杆倏截愔翈装偃f(wàn)�,便于后�(xù)的分析研�。該技�(shù)源起�20世紀(jì)70�80年代,經(jīng)�(guò)幾十年的�(fā)�,經(jīng)歷了初代傳統(tǒng)PCR、第二代熒光定量PCR和第三代�(shù)字PCR的演變,在醫(yī)療篩查診�、生命科�(xué)基礎(chǔ)研究、法�(yī)分析鑒定及食品衛(wèi)生和�(huán)境檢�(cè)等方面得到廣泛應(yīng)��


1.熒光定量PCR          

�(shí)�(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR�技�(shù),簡(jiǎn)稱qPCR,是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物�(zhì)(熒光染料或熒光�(biāo)記的特異性探針),利用熒光信�(hào)積累�(shí)�(shí)�(jiān)�(cè)整�(gè)PCR�(jìn)程,后通過(guò)�(biāo)�(zhǔn)曲線�(duì)未知模板�(jìn)行定量分析的方法�

熒光定量PCR

與普通PCR相比,實(shí)�(shí)熒光定量PCR技�(shù)是一次由定性技�(shù)向定量技�(shù)的飛�。運(yùn)用該�(xiàng)技�(shù),可以對(duì)DNA、RNA樣品�(jìn)行相�(duì)定量、定量和定性分��

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程

(圖:熒光定量PCR�(shí)�(yàn)�(guò)程)



2.�(shù)字PCR         

�(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕�(duì)定量技�(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的�(gè)�(shù),是�(duì)起始樣品的絕�(duì)定量。PCR�(shí)際上是一�(gè)在模板DNA、引�(模板片段兩端的已知序�)和四種脫氧核苷酸等存在的情況�,DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng),擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)��

數(shù)字PCR技術(shù)原理

(圖:數(shù)字PCR技�(shù)原理�


根據(jù)微反�(yīng)單元的不同形式,�(shù)字PCR�(chǎn)品可分為微板�、微滴式和芯片式等。目�,市�(chǎng)上主要的�(shù)字PCR�(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片��


三代核酸檢測(cè)技�(shù)�(duì)比:

技�(shù)方法

概念

技�(shù)�(yōu)�(shì)

技�(shù)劣勢(shì)

傳統(tǒng)PCR

采用普通PCR�(kuò)增儀�(kuò)增靶基因,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)�(chǎn)物�(jìn)行定性分�

1.可實(shí)�(xiàn)特定核酸片段的體外復(fù)�

1.相關(guān)核酸染料�(duì)操作人員和環(huán)境具有危�

2.易出�(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)�

3.耗時(shí)�(shí)間長(zhǎng)、操作復(fù)�

4.�(wú)法準(zhǔn)確定�

熒光定量PCR

是一種在DNA�(kuò)增反�(yīng)�,以熒光化學(xué)物質(zhì)�(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循�(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)�(nèi)參或者外參法�(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列�(jìn)行定量分��

1.污染�(fēng)�(xiǎn)�

2.操作流程更簡(jiǎn)單、經(jīng)�(jì)高效

3.樣品加樣量少

1.不同廠家生產(chǎn)的試劑和�(shè)備之間的差異�(duì)檢測(cè)�(jié)果影響較�,不具備可比�

2.存在背景值的影響,結(jié)果易�(chǎn)生偏�

3.低拷貝的DNA難以檢測(cè)

4.受PCR抑制物的影響較大

�(shù)字PCR

將核酸樣品分配到大量�(dú)�、平行的微反�(yīng)單元(納升級(jí))中,部分反�(yīng)單元包含靶標(biāo)分子(陽(yáng)性),而其他不包含(陰性),接著�(jìn)行擴(kuò)�,并利用TaqMan化學(xué)試劑或染料標(biāo)記探針檢�(cè)靶標(biāo)序列,能�?qū)崿F(xiàn)靶標(biāo)分子的絕�(duì)�(jì)�(shù)�

1.特異性強(qiáng)、靈敏度�

2.絕對(duì)定量,準(zhǔn)確性好

3.抗干擾能力強(qiáng)

1.特異性強(qiáng)、靈敏度�

2.絕對(duì)定量,準(zhǔn)確性好

3.抗干擾能力強(qiáng)




一、光�(xué)原理解決方案�



1.熒光定量PCR       

熒光定量PCR二向色鏡熒光定量PCR


熒光定量PCR光路圖熒光定量PCR光路圖
(圖:熒光定量PCR光路圖)


熒光定量PCR光譜
(圖:熒光定量PCR光譜�


解決方案一�

熒光通道激�(fā)波長(zhǎng)�(fā)射波�(zhǎng)二向色鏡
技�(shù)參數(shù)
Atto425Ex 430/10Em 480/10\�(shè)�(jì)波段 300-1100nm@OD6
FAMEx 470/10Em 515/10\中心波長(zhǎng)誤差±2nm
HEXEx 535/10Em 565/10\半帶�10±2nm
ROXEx 585/10Em 614/10\�(shí)�(xiàn)方式單片 / 膠合
CY5Ex 630/10Em 670/10\鍍膜工藝磁控濺射 / 真空鍍膜
CY5.5Ex 682/10Em 725/10\峰值透過(guò)�>85%

  

解決方案二:

熒光通道激�(fā)波長(zhǎng)�(fā)射波�(zhǎng)二向色鏡
技�(shù)參數(shù)
FAMEx 470/30Em 520/20505二向色鏡�(shè)�(jì)波段 300-1100nm@OD6
HEXEx 530/20Em 565/20550二向色鏡中心波長(zhǎng)誤差±3nm
ROXEx 570/20Em 615/20590二向色鏡半帶�30±3nm�20±2nm
CY5Ex 630/20Em 675/20647二向色鏡�(shí)�(xiàn)方式單片 / 膠合

鍍膜工藝磁控濺射 / 真空鍍膜
峰值透過(guò)�>90%


2.�(shù)字PCR        


數(shù)字PCR濾光片

數(shù)字PCR


數(shù)字PCR光路圖

數(shù)字PCR光譜

(圖:數(shù)字PCR光路圖)(圖:數(shù)字PCR光譜�


解決方案�

熒光通道激�(fā)波長(zhǎng)�(fā)射波�(zhǎng)二向色鏡
技�(shù)參數(shù)
FAMEx 488/20Em 527/20505二向色鏡�(shè)�(jì)波段 300-1100nm@OD6
HEXEx 527/20Em 567/15550二向色鏡中心波長(zhǎng)誤差±2nm
ROXEx 572/28Em 615/24590二向色鏡半帶�20±2nm
CY5Ex 625/26Em 661/11647二向色鏡�(shí)�(xiàn)方式單片 / 膠合

鍍膜工藝磁控濺射 / 真空鍍膜
峰值透過(guò)�>90%


�(biāo)�: PCR 熒光定量