熒光免疫層析分析儀濾光�
免疫分析儀問世已近40�，其技�(shù)原理�(fā)展至今已�(jīng)十分成熟�，尤其在21-22新冠浪潮，已有多家企�(yè)選擇熒光免疫分析路線�
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熒光免疫分析儀，由于一直采用的是免疫層析原�，所以也被經(jīng)常叫為熒光免疫層析分析儀，它的原理主要基于抗�-抗體特異性免疫反�(yīng)以及熒光�(biāo)記技�(shù)。它利用抗原與抗體之間的高度特異性結(jié)合來檢測和定量目�(biāo)分子。當(dāng)待測物與熒光�(biāo)記抗體結(jié)合后，通過光源照射，熒光標(biāo)記物會受激�(fā)而發(fā)射熒�。這些熒光信號隨后被采集并用于定量分析待測物的濃度�
原理詳情
免疫熒光技�(shù)的原理是在硝酸纖維素膜的測試區(qū)（T）包� BSA 與抗原的偶聯(lián)�，標(biāo)記墊上含有預(yù)先包被的熒光�(biāo)記抗��
檢測�，首先用處理試劑將樣本中的抗原與�(biāo)記墊上的熒光�(biāo)記抗體發(fā)生結(jié)�，形成免疫復(fù)合物，復(fù)合物在層析作用下沿著硝酸纖維素膜向前�(kuò)散至包被有另一種單克隆抗體的檢測區(qū)，從而形成雙抗體夾心�(fù)合物，而游離的熒光抗體則附著在�(zhì)控區(qū)�
�(dāng)檢測卡插入熒光免疫分析儀�，光源照射到檢測卡上，通過模塊控制LED的發(fā)光強(qiáng)度以符合測量的強(qiáng)度要�，分析儀自動掃描檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)的熒光強(qiáng)度，傳感器輸出信號經(jīng)放大和濾波處理后，�(jìn)入轉(zhuǎn)換芯片轉(zhuǎn)化為�(shù)字信號交給處理器�(jìn)行處�，通過兩種熒光�(qiáng)度的比值計算待測樣本中的抗原含��
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特點(diǎn)
免疫熒光分析技�(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、耗材保存簡單、操作簡便等特點(diǎn)，在床旁即時檢測（POCT）領(lǐng)域應(yīng)用廣�，比如檢測病�、激素、毒�、C- 反應(yīng)蛋白、糖化血紅蛋�、甲胎蛋�、降鈣素原等�
光路檢測及組�
作為免疫熒光分析儀的核�，在光學(xué)暗箱�(jié)�(gòu)�，一般由光源、激�(fā)光路、采集光�、光電傳感器、放大系�(tǒng)等組成�
光路有共聚焦光路和非共聚焦光�
共聚焦光�
光源�(chǎn)生與熒光�(biāo)記物的吸收波長相近的單色�，單色光通過激�(fā)光路，照射在試劑條特定的掃描�(diǎn)�。掃描點(diǎn)附近的熒光物�(zhì)受激�(fā)�(fā)射熒光，采集光路（也叫接受光路）將熒光收集并聚焦到光電探測器的有效接收靶面內(nèi)。采集光路除了透鏡實現(xiàn)聚焦功能�，還通過濾光�來濾除非特定波段光的干擾�
非共聚焦光路
非共聚焦光路也叫V型光�，成本相對較�，通過兩個相同的光源分別與試劑條水平面成 45°� 135°夾角，對稱的激�(fā)光源�(jīng)過透鏡和濾光片等光�(xué)器件�，聚焦于試劑條平面形成光�。激�(fā)出的熒光則沿著垂直于試劑條的光路通過濾光�、透鏡等光�(xué)器件到達(dá)光闌，并被光電探測器采集�光電探測器接受光信號�，將熒光�(qiáng)度轉(zhuǎn)換為微弱電信�。為了能夠有效的測量微弱電信號的值，系統(tǒng)中的信號放大電路對電信號�(jìn)行放�。之后模�(shù)�(zhuǎn)換器將電信號�(jié)果轉(zhuǎn)換為�(shù)字信號并送給送到微處理器�(jìn)行計算和定量分析�
濾光片選�
激�(fā)濾光片：位于光源和樣品之�，用于選擇性地傳遞激�(fā)波長的光線，濾除其他非激�(fā)波長的光��激�(fā)光路一般選用中心波長低�600nm的濾光片�在熒光免疫層析中，激�(fā)光通常是紫外光或特定波長的�，激�(fā)濾光片確保只有這些波長的光線能夠照射到樣品�，從而激�(fā)樣品中的熒光物質(zhì)�
�(fā)射濾光片：位于樣品和檢測器之間，用于選擇性地傳遞�(fā)射波長的熒光光線，濾除其他非熒光波長的光�。樣品受到激�(fā)光照射后�(fā)出的熒光光線會經(jīng)過發(fā)射濾光片，只有特定波長的熒光光線能夠通過，從而確保檢測器接收到的是純凈的熒光信號�根據(jù)熒光波長，采集光路一般選用中心波長在610~620nm濾光��
二向色鏡（二色鏡），通過反射或透射特定波長的光�，實�(xiàn)激�(fā)光和�(fā)射熒光的分離。二向色鏡通常與激�(fā)濾光片和�(fā)射濾光片一起使�，以確保激�(fā)光和熒光信號在光路中不相互干��
濾光片特性要�
高截止陡度：確保濾光片在截止波長處具有陡峭的截止特�，以減少光譜重疊和干擾�
高透過率：在所需波長范圍�(nèi)具有高的透過�，以提高信號的強(qiáng)度和靈敏��
高定位精度：確保濾光片在光學(xué)系統(tǒng)中的�(zhǔn)確位�，以保證光譜的準(zhǔn)確性和�(wěn)定��
高截止深度：通常要求濾光片截止深度在OD5（光密度）以�，以有效阻擋不需要的光線�
�(yōu)良的�(huán)境穩(wěn)定性：濾光片應(yīng)能在各種�(huán)境條件下保持�(wěn)定的性能，如溫度、濕度和光照��
在熒光免疫層析分析儀�，濾光片通常被組合使�，以形成完整的熒光檢測系�(tǒng)。例�，在檢測過程�，激�(fā)濾光片首先選擇性地傳遞激�(fā)光至樣品，樣品受到激�(fā)后發(fā)出熒�，然后熒光信號經(jīng)過發(fā)射濾光片濾除其他非熒光波長的光線，最后純凈的熒光信號被檢測器接收并�(jìn)行處理分析。同�，二向色鏡在光路中起到關(guān)鍵作�，確保激�(fā)光和熒光信號的有效分離和傳遞�
綜上所�，熒光免疫層析分析儀中的濾光片是確保分析過程�(zhǔn)確性和靈敏性的重要組成部分。通過選擇合適的濾光片類型和參�(shù)，可以優(yōu)化熒光檢測系�(tǒng)的性能并提高檢測結(jié)果的可靠��