熒光顯微鏡濾光片�(jiǎn)�
熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系統(tǒng)中的重要組件,其主要功能是選擇性地透過(guò)或反射激�(fā)光和熒光光之間的波長(zhǎng)差異。這些濾光�可以顯著提高圖像的對(duì)比度和清晰度,使得研究者能夠更�(zhǔn)確地觀察和分析樣品�
�(wú)論用什么顯微鏡,要得到�(zhǔn)確的�(shí)�(yàn)�(jié)果和�(shí)�(yàn)�(shù)�(jù),都離不�(kāi)熒光染料正確�(shè)置激�(fā)和發(fā)射波�(zhǎng),熒光染料所需的激�(fā)光和釋放的熒光都是特定波�(zhǎng)的,所以需要利用各種濾色片�(lái)選擇性的透過(guò)某種特定波長(zhǎng)的光�(lái)�(shí)�(xiàn)熒光觀�。否則就�(huì)出現(xiàn)激�(fā)不了,或者激�(fā)了卻看不到或串色的現(xiàn)�。所以選擇合適的濾色片至�(guān)重要�
顯微鏡觀察的熒光一般包括紫�、紫�(lán)綠色光兩種色�,常�(jiàn)的濾光片類型為長(zhǎng)波濾光片或帶通濾光片,在熒光顯微鏡的光學(xué)組件�,涉及光�(xué)鏡片一般分為激�(fā)濾光片、分色鏡(也叫二向色鏡)、發(fā)射濾光片,激�(fā)濾光片負(fù)�(zé)可通過(guò)的激�(fā)熒光波長(zhǎng)激�(fā),分色鏡�(fù)�(zé)精確傳遞小范圍顏色光同時(shí)反射激�(fā)光,一般而言,激�(fā)光波�(zhǎng)短于�(fā)射光波長(zhǎng),反射濾光片通過(guò)反射光阻擋其他雜散光和激�(fā)光的反射�,�(jìn)而透射到人眼�
按功能分�
激�(fā)濾光片(Excitation Filter):選擇性地透過(guò)激�(fā)光的波長(zhǎng)范圍,通常是藍(lán)色或紫色。其作用是激�(fā)樣品中的熒光染料,使其產(chǎn)生熒光信�(hào)。常�(jiàn)的激�(fā)濾光片波�(zhǎng)范圍�400-500 nm之間�
二向色鏡(Dichroic Mirror):選擇性地反射激�(fā)光的波長(zhǎng),同�(shí)透過(guò)樣品�(fā)出的熒光光信�(hào)。二向色鏡濾光片的波�(zhǎng)范圍通常�500-550 nm之間�
�(fā)射濾光片(Emission Filter):選擇性地透過(guò)樣品�(fā)出的熒光光信�(hào),同�(shí)阻擋非特異性的背景熒光。發(fā)射濾光片的波�(zhǎng)范圍取決于所使用的熒光染料�
熒光顯微鏡中各�(gè)波段的所需濾光片的�(fā)射波�(zhǎng)和激�(fā)波長(zhǎng)參�
品名 | 紫外激�(fā)� | �(lán)色激�(fā)� | CFP激�(fā)� | YFP激�(fā)� | 綠色激�(fā)� | TexasRed激�(fā)� |
激�(fā)� | 360/50nm | 475/35nm | 442/20nm | 490/20nm | 530/40nm | 560/30nm |
分光� | 400nm | 500nm | 460nm | 510nm | 560nm | 590nm |
�(fā)射片 | 450/60nm | 530/50nm | 480/30nm | 530/25nm | 605/60nm | 630/70nm |
熒光顯微鏡濾光片�??梢园凑詹煌姆诸惙绞竭M(jìn)行劃分:
按使用目的分�
通用型:適用于觀察細(xì)�、細(xì)�、病毒等一般生物樣��
專用型:針對(duì)特定研究需求設(shè)�(jì),如研究生物大分子結(jié)�(gòu)�
科研用:具備更高的精度和靈敏�,適用于深入的科�(xué)研究�
按材料分�
石英玻璃:具有優(yōu)異的光學(xué)性能和穩(wěn)定��
硅酸鹽玻璃:成本較低,但光學(xué)性能略遜于石英玻��
氟化物玻璃:在某些特定波�(zhǎng)范圍�(nèi)具有出色的透過(guò)��
選擇與應(yīng)�
在選擇熒光顯微鏡濾光片時(shí),需要考慮以下幾�(gè)因素�
熒光染料的發(fā)射波�(zhǎng):濾光片的波�(zhǎng)范圍�(yīng)與熒光染料的�(fā)射波�(zhǎng)相匹�,以確保最佳的熒光信號(hào)檢測(cè)效果�
研究目的:不同的研究目的可能需要不同類型的濾光片組�。例如,�(duì)于高靈敏度的檢測(cè)任務(wù),可能需要選擇具有更高截止深度和更窄帶寬的濾光片�
顯微鏡類型:不同類型的熒光顯微鏡(如透射式、落射式等)可能需要不同的濾光片配��
在實(shí)際應(yīng)用中,需要根�(jù)具體情況合理選擇和搭配濾光片。例�,在透射熒光顯微鏡中,濾光片的順序通常為吸熱濾光片、激�(fā)濾光片組�、被檢標(biāo)本和阻擋濾光�。而在落射熒光顯微鏡中,則需要在激�(fā)濾光片和被檢�(biāo)本之間加入色光分離反射濾光片�
�(jià)格與供應(yīng)
熒光顯微鏡濾光片的價(jià)格因品牌、型�(hào)、規(guī)格和供應(yīng)商而異。市�(chǎng)上存在多種品牌和型號(hào)的濾光片供選�,價(jià)格從幾元到幾百元不等。在�(gòu)�(mǎi)�(shí),建議根�(jù)�(shí)際需求和�(yù)算�(jìn)行選擇,并選擇信�(yù)良好的供�(yīng)商�(jìn)行采�(gòu)�
綜上所�,熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系�(tǒng)中不可或缺的重要組件。通過(guò)合理選擇和搭配濾光片,可以顯著提高熒光顯微鏡的成像效果和研究效率�